雌激素在乳腺癌细胞中通过雌激素受体-ɑ调节PES1的表达及其稳定性的体外实验研究

摘要

目的:阐明PES1在乳腺癌细胞株中的表达情况以及PES1与雌激素受体-ɑ(estrogen receptor-ɑ,ER-ɑ)的关系。方法:培养不同的乳腺癌细胞系BICR、ZR75,采用免疫荧光法检测PES1的表达及定位,并通过顺势转染RNA干扰技术抑制PES1的表达,利用平板克隆形成实验和MTT实验检测细胞的生长增殖表型改变。同时,用不同浓度梯度及不同时间点的雌激素刺激相关乳腺癌细胞,用蛋白印迹法检测PES1的蛋白表达水平。最后,利用雌激素刺激上述细胞并通过RNA干扰抑制ER-ɑ后,使用蛋白印迹法检测PES1蛋白表达水平,同时,在放线菌酮的作用下,进一步检测乳腺癌细胞中PES1与ER-ɑ之间的相关性和稳定性,并进一步检测ER-ɑ对PES1的泛素化水平的影响。结果:我们通过免疫荧光发现PES1在几种乳腺癌细胞中均表达,并进一步证明干扰PES1可以抑制乳腺癌细胞克隆的形成及生长。此外,我们在乳腺癌细胞中发现雌激素主要通过其受体ER-ɑ提高PES1的蛋白水平,进一步发现雌激素对PES1转录的影响并不明显,而可能是通过ER-ɑ影响PES1的泛素化水平进而增强PES1蛋白的稳定性。结论:对于乳腺癌细胞,内源性ER-ɑ和PES1在乳腺癌的发生发展中相互协调发挥着重要作用。