二甲双胍通过AMPK/Smad3信号通路抑制卵巢癌腹腔间皮细胞的间皮-间质转化

摘要

目的:探讨二甲双胍对人腹腔间皮细胞(human peritoneal mesothelial cells,HPMC)间皮-间质转化的影响及其可能机制,以及进一步对卵巢癌细胞系SKOV3系膜清除能力的影响。方法:搜集2018年02月至2021年02月襄阳市第一人民医院妇产科正常网膜组织和高级别浆液性卵巢癌网膜转移灶标本进行免疫组织化学检测Calretinin表达情况;分离、培养原代人腹腔间皮细胞并进行Calretinin流式鉴定;Western blot和Transwell实验检测二甲双胍或肿瘤上清处理正常患者来源HPMC后其间皮-间质转化相关蛋白(E-cadherin、Vimentin、α-SMA)及迁移能力改变情况;Western blot检测二甲双胍、Smad3抑制剂及AMPK干扰处理前后正常来源原代人腹腔间皮细胞中MMP2、E-cadherin、Vimentin、p-AMPK和p-Smad3的表达情况;SKOV3球体的系膜清除实验验证二甲双胍预处理人腹膜间皮细胞系HMrSV5对SKOV3系膜清除能力的影响。结果:正常网膜中Calretinin表达于腹腔侧表面的腹腔内皮细胞,卵巢癌网膜转移灶表面Calretinin表达缺失,肿瘤间质中高表达Calretinin;分离培养的肿瘤来源原代人腹腔间皮细胞流式检测表现为CD326^(-)CD45^(-)CD31^(-)Calretinin^(+);二甲双胍能够抑制肿瘤上清诱导的正常来源原代HPMC的间皮-间质转化及迁移;二甲双胍能够抑制肿瘤上清诱导的正常来源原代HPMC中Smad3/MMP2通路活化和E-cadherin表达,并依赖于AMPK信号活化;二甲双胍预处理HMrSV5通过AMPK信号的介导抑制了HMrSV5的间皮-间质转化进而间接抑制了SKOV3的系膜清除能力。结论:卵巢癌转移灶中的间质成分部分来源于腹腔间皮细胞,二甲双胍通过AMPK调控的Smad3信号通路抑制其间皮-间质转化,进而抑制卵巢癌肿瘤细胞的系膜清除。