幽门螺杆菌flaA基因表达载体的构建和产物免疫性的鉴定

摘要

采用高保真PCR从幽门螺杆菌Y06株DNA中扩增全长flaA基因片段,T-A克隆后测定核苷酸序列,构建pET32a的flaA表达载体,在E.coli BL21DE3宿主菌中用不同浓度的IPTG诱导表达,采用Hp全菌抗体的western blot和兔抗融合蛋白血清的免疫扩散试验鉴定其免疫性.所克隆的flaA基因核苷酸和氨基酸序列与文献报道的同源性分别为96.28%～97.13%和99.41%～100%.pET32a-flaA-BL21DE3系统表达的FlaA融合蛋白量高达细菌总蛋白的40%～50%.FlaA融合蛋白能与Hp全菌抗体及家兔免疫血清发生结合反应.