西瓜花叶病毒HC-Pro基因的克隆与原核表达

摘要

利用RT-PCR方法获得了西瓜花叶病毒（WMV）陕西分离物HC-Pro基因，大小为1371bp．将HC—Pro基因克隆到pMD18-T SimpleVector，测序分析发现与其它国家HC—Pro核苷酸同源性为90．7％～94．8％．将HC—Pro基因定向插入EcoRⅠ／SalⅠ切开的pET30a中，构建了原核表达载体pET30-WHC，转化大肠杆菌BL21．经IPTG诱导2～8h后，成功表达了分子量约为57kD的HC-Pro蛋白．通过不同时间诱导发现，加入IPTG2h后蛋白开始表达，继续诱导到8h后表达量变化不大．以诱导的蛋白为抗原免疫家兔，制备了HC-Pro蛋白的抗血清，ELISA法测其效价为1／6400，Westernblot分析能与HC-Pro发生血清学反应．