家蝇Actin-5C基因启动子的生物信息学分析及载体构建

摘要

目的 运用生物信息学分析家蝇(Musca domestica L.)肌动蛋白5 C(Actin-5 C)基因,构建Actin-5 C启动子双荧光素酶报告基因表达载体.方法 使用伯克利果蝇基因组计划(BDGP)在线分析软件、Promoter 2.0和在线比对启动子网站(FPROM)等多种启动子预测工具,分析、预测家蝇肌动蛋白Actin-5 C基因5′端上游非编码区,根据预测结果构建截短式启动子萤火虫荧光素酶报告基因重组质粒,转染草地贪夜蛾卵巢细胞系sf9细胞,并使用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)进行萤火虫荧光素酶报告基因的检测.结果 Actin-5 C基因5′端上游的-2609～-94 bp,预测有启动活性,且分值达0.8分以上,其中-2198～-2148 bp分值最高、达0.98分;在-220 bp和-1444 bp处分别检测到CAAT和TATA盒信号,经比较取最有可能的1156 bp(-1236～-80 bp)、1745 bp(-1825～-80 bp)及2059 bp(-2139～-80 bp)截断启动子片段,构建pGL3-1156、pGL3-1745及pGL3-2059质粒,RT-PCR检测到3种重组质粒中的萤火虫荧光素酶报告基因转录成功.结论 生物信息学预测工具研究家蝇Actin-5 C基因启动子可以简化认知基因的过程,根据预测结果构建了家蝇Actin-5 C基因萤火虫荧光素酶报告基因表达载体.