利用大肠杆菌高效制备人端粒酶逆转录酶抗原肽

摘要

目的利用大肠杆菌基因工程系统建立人端粒酶逆转录酶hTERT抗原肽的高效制备方法。方法利用抗原表位预测软件SYFPEITHI、BIMAS与EpiJen确定截短表达策略,通过ProtScale软件亲水性分析改善表达产物的可溶性。目的基因克隆于表达载体pET21b,高浓度尿素裂解法溶解包涵体蛋白,稀释复性法复性。结果3个覆盖全长hTERT的截短片段仅Ser480-Leu665能高效表达,但所形成的包涵体蛋白难溶于8 mol/L尿素。进一步优化所获的Tyr562-Ile665包涵体蛋白则可溶,且经纯化后可有效复性,产物纯度达到95%以上。结论利用大肠杆菌系统成功建立了hTERT抗原肽高效制备方法,为后续肿瘤疫苗的开发应用奠定了基础。