PCR法制备地高辛标记DNA探针斑点杂交检测对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)

摘要

利用非放射性标记物地高辛(DIG),通过PCR方法制备了对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV) DNA探针,探针长度705 bp,标记产量为20 ng/μL.通过核酸探针斑点杂交检测方法对此探针特异性及灵敏度进行验证,结果表明,该探针具有较高的灵敏度和较强的特异性,检测IHHNV DNA的检出灵敏度为24.8 pg,可检出26.6 ng患病对虾组织DNA中的IHHNV,与250.4 ng健康虾组织DNA、202.5 ng健康虾匀浆液,白斑综合症病毒(WSSV) DNA和肝胰腺细小病毒(HPV) DNA均不发生交叉反应.本方法可应用于健康亲虾、苗种的培育和无特定病原(SPF)对虾种群的选育及IHHNV流行病学调查,并具有较高的应用价值.