siRNA阻断肌成纤维细胞内源性Smad3表达的研究

摘要

目的 观察Smad3基因的RNA干扰(RNAi)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的小鼠肌成纤维细胞(C2C12)的Smad3表达.方法 实验分为实验组、内对照组和空白对照组.用不同浓度TGF-β1干预C2C12细胞,利用体外转录合成的siRNA-Smad3,以阻断Smad3基因表达.用Western blot检测Smad3和磷酸化的Smad3.结果 5 ng/ml TGF-β1干预C2C12细胞,促进Smad3磷酸化.0.5 h开始诱导Smad3磷酸化,5 h达高峰.TGF-β1干预C2C12细胞,诱导Smad3磷酸化呈剂量依赖性.siRNA-Smad3转染C2C12细胞24 h,Smad3表达逐渐被抑制到无表达.siRNA-Smad3转染C2C12细胞24 h后,加5 ng/ml TGF-β1干预,Smad3无表达.结论 TGF-β1促进C2C12细胞Smad3磷酸化呈剂量与时间依赖性;siRNA阻断C2C12细胞Smad3表达与Smad3磷酸化.