半枝莲通过Hedgehog非经典信号通路抑制结肠肿瘤干细胞自我更新和分化

摘要

目的:探究半枝莲醇提物对结直肠干细胞自我更新和分化的影响并阐明其分子作用机制。方法:慢病毒转染结肠肿瘤HT-29细胞,磁珠抗体标记法分选结肠干细胞;用CCK-8法检测半枝莲对肿瘤干细胞的活性;3D培养法、干细胞成球实验、琼脂糖集落实验探究半枝莲对HT-29Smo-CSC的生长更新及其转化的影响。实时荧光定量PCR和Western blot技术检测半枝莲对非经典Hedgehog信号通路基因和蛋白Shh、Ptch1、Gli1、Sufu及其标记基因CD133、靶基因c-Myc、分化基因CK20、增殖基因Ki67、更新基因Nanog的影响。结果:半枝莲能抑制HT-29Smo-CSC活性、生长转化及成球能力,显著下调Gli1、c-Myc、Shh mRNA及蛋白的表达,上调Sufu,下调Ptch1、CD133、CK20、Ki67、Nanog mRNA表达。结论:半枝莲醇提物能抑制HT-29Smo-CSC的增殖和分化,对非经典Hedgehog信号通路关键靶基因和蛋白有显著抑制作用,提示半枝莲能通过非经典Hedgehog信号通路抑制结直肠肿瘤干细胞自我更新和分化。