森林草莓DDM1基因RNAi干扰载体的构建及功能分析

摘要

DNA甲基化对植物的生长发育、器官分化等生物过程有着很重要的影响.研究通过构建森林草莓DDM1基因(Decrease in DNA methylation1)RNA干扰(RNA interference,RNAi)载体,对该基因的功能进行初步探究.以森林草莓的cDNA为模板克隆出基因正向片段DDM1-1和反向片段DDM1-2,然后将其分别连接到内含子的干涉表达载体上,构建RNAi表达载体;再通过冻融法将其转入到根癌农杆菌EHA105感受态细胞中,利用叶盘法进行森林草莓遗传转化;最后通过Gus染色对阳性苗进行鉴定,然后对转基因草莓植株进行了表型观察和FveDDM1基因表达量分析.结果 显示,与对照植株相比,转基因植株FveDDM1基因的表达量降低,叶片出现了明显的畸形,叶边缘变窄,缺刻变深.研究结果可为进一步探讨DDM1基因的功能及甲基化对植物叶片生长发育的影响提供一定的基础.