Reteplase(K)原核分泌表达载体的构建及其初步表达

摘要

在原核表达载体pErA(K)的基础上,构建新型原核分泌表达栽体pBrA(K),并实现其在原核表达系统中的表达.用限制性内切酶Nco I,Xho I同时双酶切获得目的基因rPA(K)后,以T4连接酶将其连接到pET-20b(+)上,构建新型原核分泌表达栽体pBrA(K)并实现了在大肠杆菌中表达,经纤维蛋白平板检测存在于重组菌株培养液上清中的分泌蛋白有溶纤活性.ELISA结果显示表达产物与抗t-PA抗体呈现特异性阳性反应,进一步参考标准曲线得出样品中rPA(K)的平均含量为51 ng/mL.实验结果证明新型原核分泌表达载体pBrA(K)构建成功,并实现了其在原核表达系统中的表达,为新型rPA(K)的表达优化及后续的纯化研究工作奠定了基础.