线粒体蛋白HIGD1A调控细胞自噬增强HeLa细胞辐射抗性

摘要

为探究线粒体蛋白HIGD1A通过调控自噬增强宫颈癌细胞(HeLa)辐射敏感性的机制,以对照细胞和HIGD1A敲低的HeLa细胞为研究对象,利用自噬诱导剂Earle’s平衡盐溶液(EBSS)和电离辐射处理细胞,Western Blot检测细胞自噬标志蛋白LC3、P62的表达水平,并检测Ad-mCherry-GFP-LC3B重组腺病毒感染细胞的荧光表达水平;CCK-8检测氯喹/雷帕霉素预处理2 h,并在辐照处理之后48 h的细胞活力;Western Blot检测雷帕霉素处理之后的caspase-7和cleaved caspase-3蛋白表达水平。结果显示:与对照细胞相比,敲低HIGD1A抑制EBSS和电离辐射处理之后LC3的生成、P62的降解和mCherry-GFP-LC3黄色斑点、红色斑点的生成;CCK-8检测结果发现,敲低HIGD1A并结合氯喹处理降低了细胞在电离辐射处理之后的细胞活力;此外,敲低HIGD1A显著增加了肿瘤细胞中caspase-7和cleaved caspase-3蛋白表达水平,在雷帕霉素处理后HIGD1A敲低细胞中仍存在较高的凋亡水平。结果表明,HIGD1A通过自噬途径参与调节肿瘤细胞的辐射敏感性。