柞蚕ApMLEC的重组表达和功能分析

摘要

对柞蚕Malectin(ApMLEC)进行克隆、蛋白表达纯化和初步功能分析。基于已知的柞蚕cDNA数据库,通过PCR克隆ApMLEC基因,生物信息学分析序列信息;将基因连接至pET-28a原核表达载体,通过大肠杆菌BL21(DE3)表达系统和亲和层析法纯化重组蛋白,探究该蛋白结合多糖、凝集细菌和抑菌能力;通过将基因连接至转移载体pApBacDual-egfp探究其抗病毒作用。结果表明:基因由798个碱基构成,编码266个氨基酸,纯化得到分子质量约为33 ku、带有组氨酸标签的重组蛋白;ApMLEC能够与麦芽糖、脂多糖、肽聚糖结合;凝集细菌;抑制大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的生长,且最小抑菌质量浓度均为250μg/mL;并抑制ApNPV病毒的复制。ApMLEC初步功能分析结果表明其可能在柞蚕天然免疫中发挥重要作用,为今后开展柞蚕免疫系统的研究奠定基础。