hdac8基因敲除对斑马鱼运动能力的影响

摘要

为研究鱼类hdac8的生物学功能,以斑马鱼(Danio rerio)作为模式生物,利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,针对hdac8基因的第3个外显子设计Cas9靶位点,并制备gRNA。将gRNA与Cas9蛋白显微注射至一细胞期的斑马鱼胚胎中。经过T7E1核酸内切酶酶切、测序和序列比对后确定hdac8敲除成功,进一步获得F 2代缺失41个碱基对的hdac8的纯合突变体斑马鱼。RT-qPCR结果显示:与WT斑马鱼相比,hdac8^(-/-)斑马鱼的hdac8 mRNA表达量显著下调(P<0.0001);而hdac1的mRNA的表达量补偿性增加(P<0.05),hdac3的mRNA表达水平无显著性差异。Western Blot显示hdac8-/-斑马鱼全鱼和肌肉组织中H3K27ac、H3K9me3、H3K4me3和H3K4me1的表达水平都没有发生显著变化。斑马鱼行为轨迹跟踪系统检测发现,与WT斑马鱼幼鱼相比,hdac8^(-/-)斑马鱼幼鱼的最大加速度无明显差异,但运动总距离、平均速度、活动性均显著性降低(P<0.0001),说明敲除hdac8基因会对斑马鱼幼鱼的运动能力造成影响。