脑提取物中Calcineurin活性测定方法的优化

摘要

以32P标记的RII多肽为底物,研究了在脑提取物中钙调神经磷酸酶(CN)活性的测定过程中,CN活性依赖的一些离子或蛋白及测活条件对CN活性的影响,对脑提取物中CN活性的测定方法进行了优化.实验表明,脑提取物中的Ca2+足以激活CN活性,在测活反应体系中不需再补加Ca2+,但补加钙调素(CaM)是必须的,其在反应体系中的最适浓度是0.13μmol.L-1;抑制反应体系中的CN活性的最适EGTA浓度为0.16 mmol.L-1;对于脑提取物中的CN活性,Mn2+是比Mg2+更有效的激活剂,其最适终浓度为0.5 mmol.L-1;脑匀浆过程中蛋白酶抑制剂的加入有助于在90min内保持CN的活性.