细胞外通量分析技术在红细胞能量代谢研究中的应用

摘要

目的:探索Seahorse XFe细胞能量代谢检测仪检测红细胞能量代谢的实验条件及方法,对传统红细胞能量代谢检测方法进行补充.方法:向Seahorse细胞培养板添加不同数量的红细胞,并根据倒置显微镜下红细胞分布状态确定最优细胞检测密度;利用Seahorse XFe24细胞能量代谢检测仪,在37℃条件下,向活体红细胞依次添加不同浓度的葡萄糖(Glucose)以及2-脱氧-D-葡萄糖(2-Deoxy-D-Glucose,2-DG)并连续监测其胞外酸化率(Extracellular acidifi-cation rate,ECAR)的变化,计算其基础糖酵解(Baseline glycolysis)、葡萄糖反应性(Glucose response)以及糖酵解能力(Glycolytic capacity)3个指标.结果:通过镜下观察红细胞分布状态得到最佳的红细胞检测密度为(5～6)×108/well,通过对基础糖酵解、葡萄糖反应性以及糖酵解能力3个指标的分析得到最佳葡萄糖和2-DG作用终浓度分别为10 mM和100 mM.结论:应用Seahorse XFe细胞能量代谢检测仪能够保证检测过程中细胞的完整性及活性,检测结果具有连续性及动态性,为红细胞能量代谢的相关研究提供了一个更为全面的研究体系.