小反刍兽疫病毒非结构蛋白C和V基因突变的克隆与表达

摘要

反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus, PPRV) C和V蛋白是P基因通过特殊编码方式产生的两种非结构蛋白,他们通过抑制干扰素产生在天然免疫中发挥重要作用。本研究将C基因起始密码子AUG突变为ACG,并在氨基酸序列的第9位、第12位引入终止密码子,在V基因编码氨基酸序列的第7位、第285位、第294位引入三个终止密码子,运用PCR技术扩增获得了表达沉默的突变基因ΔC和ΔV,构建了真核表达载体p3flag-CMV-14-ΔC和p3flag-CMV-14-ΔV。实时荧光定量PCR (RT-qPCR)检测表明转染突变基因质粒HEK-293T细胞中C基因(P<0.001)和V基因(P<0.01)表达均极显著降低,蛋白质印迹(Western blot)检测表明转染突变基因质粒细胞中C蛋白和V蛋白均无表达。研究结果为进一步研究PPRV病毒C和V蛋白的功能提供了科学依据。