牙鲆NTF3基因克隆与表达分析

摘要

造成牙鲆(Paralichthys olivaceus)工厂化养殖中大规模死亡的主要病原之一是迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda),其有感染力极强、致死率极高的特点,严重影响牙鲆水产养殖产业的健康发展.神经营养因子3(neurotrophin3,NTF3)是一种神经营养因子,可能参与免疫系统的调节.为研究NTF3在牙鲆先天免疫中的功能,本研究克隆了牙鲆NTF3基因的全长cDNA序列,其长度为1411 bp,其中,5'非编码区长89 bp,3'非编码区长428 bp,ORF长894 bp.基因ORF编码297个氨基酸.预测分子量(molecular weight,Mw)约为33.73 ku,理论等电点为9.56.同源比对发现,NTF3基因在不同物种间的相似度较高,牙鲆与高体鰤(Seriola dumerili)NTF3基因的同源性最高,为90.91％.NTF3基因在牙鲆健康组织(血液,肝脏,脾脏,肾脏,肠,皮肤,鳃,心脏和脑)中均有表达,皮肤中的表达量最高,血液中次之.为进一步探究牙鲆感染迟缓爱德华氏菌过程中NTF3相对表达量的变化,本研究对健康牙鲆进行了迟缓爱德华氏菌感染实验,比较了NTF3在4种组织(脾脏,肝脏,肠,肾脏)不同感染时间点的相对表达量,在脾脏、肝脏、肠中,牙鲆感染迟缓爱德华氏菌后NTF3基因的表达量均出现上调,但在肾脏中,NTF3的表达量呈现下调趋势.上述结果表明,NTF3基因参与了牙鲆抵抗迟缓爱德华氏菌感染的免疫过程,而病菌感染后不同组织中NTF3基因的相对表达量差异的结果为今后更深入研究NTF3基因在牙鲆免疫应答过程中发挥的作用提供了基础研究数据.