人乳头瘤病毒16型E7蛋白的表达、纯化及抗血清制备

摘要

目的建立人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV） 16型E7蛋白的原核表达系统,表达HPV16 E7蛋白,制备小鼠抗HPV16 E7血清。方法采用PCR方法扩增HPV16 E7基因,构建入pET21b质粒,重组表达载体经鉴定后转化大肠埃希菌BL21（DE3）。诱导表达后经十二烷基硫酸钠（sodium dodecyl sulphate,SDS）-聚丙烯酰胺凝胶电泳（polyacrylamide gel electrophoresis, PAGE）和Western blot鉴定表达产物。提取包涵体进行变性复性处理后纯化,纯化后的可溶性蛋白免疫Balb/C小鼠,检测小鼠体内γ-干扰素（interferon-γ,IFN-γ）水平、CD4/CD8比值和抗血清滴度变化。结果 PCR扩增片段为0.3 Kb,酶切和序列测定证实重组质粒构建正确。SDS-PAGE在11 KD处出现蛋白条带。蛋白表达以包涵体为主。免疫后小鼠抗体效价升高,CD4/CD8比值无升高,IFN-γ无反应。结论成功制备可溶性HPV16E7蛋白和小鼠抗HPV16E7高效价抗血清。