基于TGF-β1/Smad3信号通路探讨黄芪甲苷对甲状腺功能减退幼鼠肾损伤的改善作用

摘要

目的:探讨黄芪甲苷(AS-Ⅳ)通过介导转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad3信号通路对甲状腺功能减退(HT)幼鼠肾损伤的作用。方法:随机选取10只30日龄雄性Wistar大鼠作为正常组,剩余50只幼鼠连续28 d灌胃6 mg/kg剂量的6-丙基-2-硫尿嘧啶(PTU)以诱导HT模型。成功建模43只,随机剔除3只后剩余大鼠分为模型组、AS-Ⅳ低剂量组、AS-Ⅳ高剂量组及左甲状腺素钠(LS)组,每组各10只。建模成功次日给药,其中AS-Ⅳ低、高剂量组及LS组幼鼠灌胃给药量分别为20、40 mg/(kg·d)和5μg/(kg·d),正常组及模型组大鼠灌胃等体积生理盐水,每日1次,连续5周。给药结束后采用Bradford法检测24 h尿蛋白(Alb)含量;测定肾脏脏器指数;HE染色法观察肾组织形态学变化;Masson染色法观察肾组织胶原蛋白沉积情况;ELISA法检测甲状腺功能指标即血清游离三碘甲腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)及促甲状腺素(TSH)水平;生化分析仪检测肾功能指标即血清肌酐(Scr)及尿素氮(BUN)含量;Western blot法检测肾组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)、TGF-β受体I型(TβRI)、Smad3、p-Smad3、Smad7、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)蛋白相对表达情况。结果:本研究成功构建HT幼鼠模型;与正常组比较,模型组幼鼠血清FT3、FT4水平降低,TSH水平升高,肾脏脏器系数、24 h尿Alb含量、Scr及BUN含量升高(P<0.05),肾组织中可见明显肾间质损伤,有大量胶原纤维表达和沉积,肾组织中TGF-β1、TβRI、α-SMA、ColⅠ蛋白相对表达水平及p-Smad3/Smad3升高,Smad7蛋白相对表达水平降低(P<0.05);与模型组比较,AS-Ⅳ低、高剂量组及LS组幼鼠血清FT3、FT4水平升高,TSH水平降低,肾脏脏器系数降低、24 h尿Alb含量Scr及BUN含量降低(P<0.05),肾组织结构病理损伤逐渐改善,胶原纤维沉积情况逐渐减轻,肾组织中TGF-β1、TβRI、α-SMA、ColⅠ蛋白相对表达水平及p-Smad3/Smad3降低,Smad7蛋白相对表达水平升高(P<0.05);AS-Ⅳ低、高剂量组及LS组改善HT幼鼠肾损伤的作用效果逐渐增强。结论:AS-Ⅳ可减轻HT幼鼠肾组织病理结构及纤维化,改善肾功能,其作用机制可能与抑制TGF-β1/Smad3信号通路激活有关。