小鼠胚胎成纤维细胞饲养层、Matrigel及贴附因子包被培养板培养小鼠胚胎干细胞的对比研究

摘要

为进一步优化细胞外基质,建立胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)稳定的体外培养体系,试验分别采用小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEFs)饲养层、基质胶(Matrigel)和贴附因子(attachment factor,AF)细胞培养板,以N2B27为基础培养基,评估和比较不同处理对小鼠ESCs(mESCs)自我更新及多能性维持的影响。结果表明:在KSR浓度为5%的N2B27培养基中,MEFs饲养层的mESCs形态立体,边缘清晰,呈规则的圆顶状;Matrigel、AF细胞培养板培养的mESCs形态立体,呈集落样生长。MEFs饲养层培养的mESCs传代后黏附快,集落形成显著快于Matrigel、AF细胞培养板,AF细胞培养板培养的mESCs黏附少,集落形成慢。免疫荧光染色结果显示,3种处理的mESCs均表达Oct4和Sox2蛋白,但AF细胞培养板培养的mESCs中Oct4、Sox2和Nanog的转录表达水平低于Matrigel细胞培养板,其中Sox2和Nanog差异显著或极显著(P<0.05或P<0.01)。说明AF可用于mESCs培养,但在细胞黏附、增殖速率及多能因子表达上与MEFs、Matrigel有差异。