玉米鞘腐病菌ISSR-PCR反应体系优化

摘要

玉米鞘腐病的主要病原为层出镰孢(Fusarium proliferatum),为明确其ISSR-PCR最佳反应体系,本文以层出镰孢DNA为模板,筛选各因子浓度范围,利用单因素试验,对5因素进行优化,确定最佳反应体系,从13条供试引物中筛选扩增条带清晰、多态性好的引物,并筛选最适退火温度.结果表明:ISSR-PCR最佳反应体系各因子浓度分别为模板DNA 40 ng·μL-1、镁离子浓度2.5 mmol·L-1、引物浓度为0.4μmol·L-1、dNTPs浓度0.2 mmol·L-1、T aq酶浓度为2.5 U·μL-1,最适ISSR引物为808,最适退火温度是58℃,用筛选的最适引物808对供试菌株扩增出14条条带,多态性条带13条,多态性条带比率为92.90％.