组蛋白去乙酰化酶抑制剂增强三氧化二砷对U266细胞株的抗肿瘤作用机制研究

摘要

目的 通过研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂(SAHA)、三氧化二砷(ATO)及其联合应用对U266细胞增殖和凋亡的影响,探讨药物的联合应用及其相互作用可能的机制.方法 采用CCK-8法检测SAHA、ATO单用或联合应用对U266细胞增殖抑制作用;Annexin-VFITC/PI双染流式细胞术、AO/EB荧光染色法检测细胞凋亡;Western blot方法检测细胞死亡过程中Acetyl-Histone H3、Acetyl-Histone H4、Akt、P53等相关蛋白的变化.结果 SAHA和ATO可明显抑制U266细胞增殖,且具有时间和剂量依赖性.两药联合对U266细胞的增殖抑制具有相加作用.SAHA和ATO诱导U266细胞凋亡呈剂量依赖性.SAHA 2μmol/L、ATO 16μmol/L以及SAHA 2μmol/L与ATO 16μmol/L联合作用后48 h,U266细胞凋亡率分别为(17.90±2.60)％、(26.45±4.95)％和(81.60±4.20)％.两药联用组细胞的凋亡率较单药组均明显升高(P<0.01),以晚期凋亡为主.Western blot结果显示,SAHA单药组及联用组Acetyl-Histone H3和H4蛋白表达水平显著上调;联用组P53蛋白表达下调;各药物组Akt蛋白表达水平未见明显改变.结论 SAHA、ATO对U266细胞均具有抑制增殖及诱导凋亡的作用,其效果呈时间-剂量依赖性.将SAHA与ATO联用可明显抑制U266细胞的增殖,降低P53表达水平,明显提高U266细胞凋亡率.其作用的机制可能与上调Acetyl-Histone H3蛋白、Acetyl-Histone H4蛋白表达水平有关.