大鼠骨髓间充质干细胞的标记跟踪及自体移植对骨折愈合的影响

摘要

目的:体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),分别采用BrdU、DAPI对BMSCs进行体外染色标记,同时自体移植BrdU标记的BMSCs,观察其对大鼠胫骨骨折愈合的影响。方法:BMSCs取自SD大鼠的股骨和胫骨,分离培养BMSCs至第三代时,采用流式细胞仪对其表面抗原CD34、CD44和CD45进行测定;同时分别用BrdU、DAPI对BMSCs进行染色标记。选取3月龄雌性SD大鼠24只,随机分为三组(n=8),A组为左胫骨骨折组,B组为左胫骨骨折+DMEM组,C组为左胫骨骨折+骨髓间充质干细胞移植组。术前两周C组取自体BMSCs,采用BrdU标记,术后2天将标记好的细胞以局部注射的方法移植到骨折断端,同时B组局部注射等量DMEM。各组动物分别于术后1、2、3、4周拍摄左胫骨DR,测量骨痂宽度,评价骨折愈合情况。结果:流式细胞仪检测证实:实验成功分离培养出了高纯度的BMSCs(免疫表型CD44阳性,CD34、CD45阴性);采用BrdU(浓度10μmol/L,时间48hours)和DAPI(浓度20μg/ml,时间30 min)染色标记BMSCs安全有效;BrdU标记的BMSCs在移植后第3周时仍然存在荧光标记。术后1、2、3、4周各胫骨骨痂宽度测量:术后第1、2周,三组实验动物骨痂宽度无明显差异(P>0.05),术后第3、4周时C组骨痂宽度较A、B两组差异有统计学意义(P<0.05)。结论:采用黏附贴壁分离培养法能够有效获取高纯度的BMSCs;运用Brdu、DAPI方法标记BMSCs效果良好,方法可靠;大鼠BMSCs的自体移植能够促进骨折愈合。