茉莉花JsMYB305转录因子的原核表达及蛋白纯化

摘要

【目的】获得茉莉花香气调控转录因子JsMYB305的重组蛋白,为深入研究JsMYB305调控茉莉萜类香气代谢的分子机理及筛选其他互作蛋白提供基础。【方法】通过酶切连接的方式,将JsMYB305的编码序列构建到原核表达载体pGEX-4T-1,转化BL21(DE3)表达菌株,通过IPTG诱导蛋白表达、GST亲和树脂分离纯化,最后Western Blot鉴定重组蛋白。【结果】重组蛋白的诱导条件为0.2 mmol·L^(−1) IPTG,最适宜纯化的温度和时间为28℃诱导4 h,经20 mmol·L^(−1) GSH洗脱的蛋白纯度较好,Western Blot结果表明重组蛋白的大小正确。【结论】成功获得了JsMYB305重组蛋白,为后期利用GST-pull down技术筛选互作蛋白及EMSA研究JsMYB305对特定启动子位点的结合提供基础。