青蛤Ⅰ型溶菌酶在毕赤酵母中的重组DNA表达

摘要

Ⅰ型溶菌酶是无脊椎动物免疫系统中一种富含半胱氨酸的重要蛋白质免疫因子,具有良好的抗病原微生物功能。通过反转录PCR自青蛤闭壳肌中克隆到Ⅰ型溶菌酶(CslyⅠ)基因,以pPⅠCZαA为表达载体、毕赤酵母X-33为工程菌,构建重组毕赤酵母菌株X-33/pPⅠCZαA-CslyⅠ,经高质量浓度博莱霉素培养基筛选获得高拷贝重组菌株。该菌株在28℃、250r/min条件下,经1%甲醇诱导表达72h后获得蛋白质类表达产物。Western blot和MALDⅠ-TOF/TOF质谱分析表明,该表达产物为预期的重组青蛤Ⅰ型溶菌酶;进一步的抑菌试验证明,该重组青蛤Ⅰ型溶菌酶具有抗金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和副溶血性弧菌的活性,并且显示良好的热稳定性。本研究可为无脊椎动物来源Ⅰ型溶菌酶的制备提供基于重组毕赤酵母的生物合成技术。