镉胁迫对黄鳝醛酮还原酶基因表达的影响

摘要

采用RACE-PCR技术获取黄鳝醛酮还原酶(Eakr)基因5′cDNA末端和3′cDNA末端,采用基因特异性引物扩增其内含子序列,获得其基因结构;将黄鳝养殖在15 mg/L CdCl2的曝气水中,分析Cd^(2+)处理对Eakr基因表达的影响;采用液体培养和斑点展示法,比较重组Eakr基因菌株和阴性对照菌株在Cd^(2+)暴露下的存活率及生长活力。研究结果表明,Eakr基因全长4468 bp,包含1026 bp的开放阅读框,编码341个氨基酸,5′端非编码区74 bp,3′端非编码区195 bp。荧光定量PCR检测发现,Eakr基因在黄鳝的脑、血细胞、心脏、肠道、肾脏、肝脏、肌肉、性腺、皮肤、脾脏、胃中均有表达,在肝脏中表达水平最高(P<0.05)。Cd^(2+)胁迫下,肝脏中Eakr基因与Nrf2基因mRNA表达水平均显著上升;在各检测时间点,Eakr基因表达水平相比对照组均差异极显著(P<0.001),而Nrf2基因表达水平在处理后6、9、12 h差异极显著(P<0.001);含Eakr基因的重组菌存活率显著高于对照菌株,且在Cd^(2+)浓度为1.5 mmol/L和2.0 mmol/L时差异极显著(P<0.001)。