荧光标记新城疫病毒在检测病毒入侵过程中的应用

摘要

本研究利用荧光染料标记的新城疫病毒(NDV)检测病毒的吸附、融合和进入,旨在为研究NDV入侵细胞的机制提供一种工具。首先通过DiOC标记NDV(DiOC-NDV)检测病毒的吸附和进入,随后利用R18标记NDV(R18-NDV)检测病毒的融合,最后利用R18和DiOC同时标记NDV(DiOC/R18-NDV)进一步检测NDV在内体中的融合。病毒吸附的检测结果显示,代表NDV的绿色荧光定位于细胞表面。病毒进入的检测结果显示,60~120 min不能被台盼蓝淬灭以及被台盼蓝淬灭的绿色荧光强度均无明显变化(P>0.05);病毒融合的检测结果显示,30~120 min时均能在细胞表面和细胞质中观察到红色荧光,且60~120 min时细胞的总荧光强度无显著差异(P>0.05)。以上结果表明,NDV吸附细胞后,在细胞表面与内体中发生膜融合及进入,且该过程在60 min内完成。综上所述,荧光标记的NDV能直观、可靠地展现病毒的吸附、进入和融合过程,荧光标记NDV可作为一种研究NDV入侵细胞机制的工具。