猪繁殖与呼吸综合征病毒M蛋白单克隆抗体制备及抗原表位鉴定

摘要

为制备猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)M蛋白单克隆抗体,将PRRSV类NADC30毒株FJ1402的M蛋白胞外区基因与TAT穿膜肽基因融合,密码子按大肠杆菌偏嗜性优化,构建了大肠杆菌表达质粒,制备获得重组M蛋白。取6周龄雌性BALB/c小鼠免疫重组蛋白,将脾脏淋巴细胞和SP2/0细胞融合,用间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞株,获得4株分泌M蛋白抗体的杂交瘤细胞株。其中1E7、2F7、3A12的细胞上清液抗体效价为1∶3200,3G7的细胞上清液抗体效价为1∶800,传至第15代均能稳定分泌抗体。单抗经亚型鉴定可知1E7、2F7、3A12的重链类型为Ig2a,3G7的重链类型为IgG1,轻链类型都为κ型。经间接免疫荧光试验(IFA)和Western blot鉴定,4株单克隆抗体均可与PRRSV产生特异性反应,鉴定出2个抗原表位,为PRRSV诊断和疫苗研制奠定了基础。