基于猪丁型冠状病毒重组M蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立与应用

摘要

猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus, PDCoV)是近年新发现的一种猪肠道病原体,主要感染仔猪并引起仔猪腹泻甚至死亡,针对该病建立快速、准确的血清学检测方法尤为重要。本研究以PDCoV HNZK-04毒株为模板扩增M基因并将其克隆至原核表达载体pET-32a中,构建了重组质粒pET-32a-PDCoV-M。将阳性重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,并用IPTG诱导M蛋白表达,SDS-PAGE显示目的蛋白的分子量约为41 kDa;Western blot结果显示该蛋白可以与PDCoV阳性血清特异性结合。以纯化后的M蛋白作为靶抗原,建立了一种间接ELISA检测方法。用该方法对其他猪常见病毒,包括猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪圆环病毒2型(PCV2)的阳性血清进行检测,结果均为阴性;批内重复试验和批间重复试验变异系数均小于10%,表明建立的PDCoV间接ELISA检测方法具有良好的特异性和重复性,可以用于PDCoV感染的临床检测和诊断。