幽门螺杆菌hp0596基因缺失突变体的构建

摘要

目的:构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)hp0596基因缺失突变体,为进行hp0596基因功能研究奠定基础.方法:利用PCR技术,从H.pylori 26695基因组分别扩增得到hp0596基因的上游同源臂和下游同源臂,与两端带有FRT位点的氯霉素抗性基因片段共同构建同源重组载体;以重组载体为模板扩增打靶片段,将其转化入H.pylori 26695;在抗生素选择压力下,打靶片段和菌体基因组发生同源重组,通过氯霉素抗性筛选得到带有抗性标记的重组菌.结果:构建的突变载体经限制性内切酶酶切分析显示,产生的条带与预计结果完全一致.PCR方法扩增突变株0596,cmr基因显示,0596基因已经被完全敲除,经DNA测序,RNA水平,蛋白质水平证实筛选得到了0596基因缺失的H.pylori26695△0596突变株.连续培养7代后,H.pylori26695△0596突变株具有良好的稳定性.结论:获得了H.pylori26695△0596基因缺失突变体.