TatPTD介导HBV靶向核糖核酸酶进入肝细胞的研究

摘要

目的:利用HIV-Tat蛋白转导域(proteintransductiondomain,PTD)高效的跨膜转导特性,探索将乙肝病毒靶向核糖核酸酶(targetedribonuclease,TR)导入肝细胞的新途径.方法:将TR基因克隆入含TatPTD的pTAT原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)LysS内诱导融合蛋白表达并进行纯化.将纯化的Tat-TR加入培养的HepG2细胞,间接免疫荧光法检测其导入HepG2细胞的效率,MTT法检测其对细胞生长代谢的影响.将Tat-TR加入培养的HepG2.2.15细胞,定量PCR法检测HBVDNA水平并以SPSS软件进行统计分析.将Tat-TR经尾静脉注入小鼠体内2h后,对小鼠肝组织进行免疫组化染色,检测TatPTD能否在体内介导TR进入肝细胞.结果:成功地制备了Tat-TR融合蛋白,其纯度为90%.间接免疫荧光及MTT的检测结果证实Tat-TR可以跨膜导入HepG2细胞且对细胞生长没有影响.SPSS统计分析显示Tat-TR可以抑制HBV的复制.免疫组化染色结果显示,TatPTD在体内也可以介导TR进入肝细胞.结论:Tat-HBV靶向核糖核酸酶的制备及活性鉴定,为应用靶向核糖核酸酶治疗乙肝病毒感染的研究奠定了良好的基础.