短裙竹荪(Dityophora duplicata)凝集素纯化与生化性质

摘要

短裙竹荪子实体经生理盐水抽提、硫酸铵沉淀、DEAE Sepharose和SephadexG 10 0柱层析纯化得到短裙竹荪凝集素 (Dityophoraduplicata(Bosc)Fischerlectin) ,简称DDFL .DDFL经PAGE显示单一条带 ,SDS PAGE测得其亚基分子量为 2 2 3kD ,SephadexG 10 0凝胶过滤测得分子量为 4 5 3kD ,DDFL不含中性糖 ,IEF测得其等电点为 3 92 .该凝集素对供试的 4种血型人血和兔、小牛、鸭、鸡、鲫鱼以及青蛙血红细胞具有凝集作用 ,但不凝集鳖红细胞 .它还可以凝集小鼠脾脏淋巴细胞和小鼠S180 肉瘤细胞 ,对兔红细胞的凝集作用可被乳糖、棉子糖、半乳糖、α 甲基半乳糖、β 甲基半乳糖和N 乙酰半乳糖胺所抑制 .氨基酸组成分析表明 ,DDFL含有 17种氨基酸 ,其中天冬氨酸、丝氨酸、苯丙氨酸和丙氨酸含量较高 .经测定 ,其N末端为甘氨酸 .DDFL对热、酸和碱具有一定的稳定性 ,经 6 0℃处理 10min ,可保持较高的活性 ,在pH 4 0～ 9 0范围内较稳定 ,其凝血活性依赖于Mg2 + 和Ca2 + 二价阳离子 ,Mn2 + 和Zn2 + 则无影响 .DDFL对小鼠腹腔注射的半致死量为 70 6 3mg kg .