重组人N端缺失MBL的原核表达及其活性研究

摘要

目的原核表达具生物学活性的重组人N端缺失甘露聚糖结合凝集素(rhMBL△N)蛋白。方法应用PCR技术,从含中国人野生型MBL cDNA的质粒pGEM-MBL中扩增rhMBL△N基因片段,插入pET43.1a载体后,转化E.coliBL21(DE3)感受态菌诱导表达rhMBL△N蛋白。应用Ni2+-NTA琼脂糖柱纯化目的蛋白,以SDS-PAGE、Western blot和ELISA进行鉴定。结果从pGEM-MBL中扩增到长约620bp的DNA片段,构建的重组表达载体经BamHⅠ和EcoRⅠ酶切后出现约7270bp和620bp的片段,测序结果与预期的完全一致。表达的重组蛋白纯化后,经SDS-PAGE鉴定为Mr97000的蛋白。ELISA证实,纯化蛋白能与抗重组人MBL抗体结合,具备配体结合活性并能与人甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶1、2的N端片段结合。结论获得了可表达rhMBL△N的菌株和具活性的rhMBL△N蛋白,为进一步研究提供了条件。