从基因工程菌分离纯化心钠素

摘要

以高效表达的基因工程菌为材料，对以包涵体形式存在的目的产物——心钠素（ＡＮＦ）融合蛋白进行了酶切及分离纯化．先用ＴｒｉｔｏｎＸ－１００和低浓度尿素、盐酸胍洗涤，提高包涵体的纯度．再用高浓度的尿素处理，使蛋白变性溶解，脱氧胆酸钠对蛋白有明显的促溶作用．解决变性蛋白质去除变性剂时的聚合问题．在非变性条件下进行ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５凝胶过滤，ＦＰＬＣ系统纯化，得到目的融合蛋白．用凝血酶对融合蛋白作特异性切割，释放出ＡＮＦ小肽，经ＦＰＬＣ分离鉴定，与标准ＡＮＦ有相同的ＴＲ值，说明其纯度已达均一．生物活性检测表明：有明显的放免活性和舒张血管。