人骨唾液蛋白基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达

摘要

利用RT PCR技术 ,从人骨膜组织总RNA中扩增长度为 1kb的人骨唾液蛋白 (bonesialoprotein ,BSP)基因编码区序列 ,克隆至pBluescriptⅡ ,进行双链核苷酸序列测定 .构建人BSP毕赤酵母表达质粒pPICZaA hBSP并导入毕赤酵母PichiapastorisGS1 1 5 .SDS PAGE和Western印迹检测rhBSP的分泌表达 .采用镍离子亲合层析纯化rhBSP并检测生物学活性 .结果表明 ,克隆片段与基因库所登录的序列相一致 ,分泌表达的rhBSP His融合蛋白分子量约为 6 7kD ,占培养上清总蛋白的 80 % ,浓度约为 0 2 4 8g L 。