人睫状神经营养因子突变体基因克隆及高效表达

摘要

为了提高人睫状神经营养因子（ＣＮＴＦ）的生物学活性，用ＰＣＲ方法获取Ｎ端缺失１４个氨基酸的ＣＮＴＦ基因片段，经酶切鉴定、核酸测序证实突变体的核苷酸序列，将其重组至表达质粒ｐＢＶ２２０，构建了ＣＮＴＦ突变体表达载体ｐＢＶ－ＣＮＴＦΔ．用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定其表达水平，鸡胚背根节无血清培养法检测表达蛋白的生物学活性．结果表明，ｐＢＶ－ＣＮＴＦΔ能表达生物学活性高于天然ＣＮＴＦ的约２６ｋＤ蛋白质，表达水平达３０％．为今后通过基因工程方法获得ＣＮＴＦ突变体，从而制备高效的ＣＮＴＦ制剂创造了条件．