人血小板生成素全长分子在酵母系统中的分泌表达及活性分析

摘要

外源基因可通过整合型载体被整合到毕赤酵母（Ｐｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒｉｓ）染色体上，获得遗传性稳定分泌表达株．利用酵母信号肽ＭＦα，对该信号肽蛋白酶识别位点的相关序列进行重新设计，使天然人ＴＰＯ成熟肽在毕赤酵母系统中分泌表达成功．表达产物经Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ进行分析，分子量约为６６ｋＤ处蛋白条带可被ＴＰＯ抗体识别；表达量约为０．１ｇ／Ｌ；Ｎ端氨基酸序列分析结果与设计的一致；表达产物对小鼠骨髓细胞形成巨核细胞集落形成单位（ｍｅｇａｋａｒｙ－ｏｃｙｔｅｃｏｌｏｎｙｆｏｒｍｉｎｇｕｎｉｔ，ＣＦＵ－Ｍｅｇ）具有明显的刺激作用．