MAT2A基因小干扰RNA诱导人肝癌细胞凋亡的分子机制

摘要

为探讨甲硫氨酸腺苷转移酶2A(MAT2A)小干扰RNA对人肝癌细胞生长和细胞凋亡的影响及其机制,采用脂质体转染法将MAT2A小干扰RNA质粒表达载体转染人肝癌细胞系Bel-7402细胞、HepG2细胞和HepG3B细胞.半定量RT-PCR检测MAT2AmRNA表达,Western印迹检测MAT2A蛋白质表达,MTT法观察MAT2A小干扰RNA对肝癌细胞生长的影响,流式细胞仪及DAPI染色检测siRNA对肝癌细胞凋亡的影响.为探讨其作用机制,进一步检测转染后肝癌细胞MAT的活性、MAT1AmRNA表达及SAM、SAH含量.结果发现,MAT2A小干扰RNA特异性抑制人肝癌细胞MAT2AmRNA和蛋白质的表达,刺激MAT表达由MAT2A向MAT1A转变,降低了肝癌细胞中MATⅡ活性(P<0·05),从而诱导肝癌细胞凋亡;MAT2A小干扰RNA诱导Bel-7402细胞、HepG2细胞、Hep3B细胞凋亡指数分别为19·3%±2·8%、22·8%±3·5%、21·8%±4·2%,较对照组siRNA(凋亡指数为5·2%±1·9%)具有明显差异(P<0·05).DAPI染色显示,MAT2A小干扰RNA转染组可见多个细胞核浓缩、碎裂成蓝色的小块状,染色质凝聚,形成典型的凋亡小体,而对照siRNA转染组未发现典型的凋亡小体.肝癌细胞的生长也受到抑制,MAT2A小干扰RNA转染Bel-7402细胞、HepG2细胞、HepG3B细胞72h后,细胞生长抑制率达高峰,分别为39·62%、41·27%、38·84%.肝癌细胞中SAM含量明显升高(P<0·01),而SAH含量改变不明显,SAM/SAH变化伴随SAM含量变化而改变.提示靶向MAT2A基因的siRNA通过升高肝癌细胞中SAM含量,刺激MAT表达由MAT2A向MAT1A转变,从而诱导肝癌细胞凋亡,抑制肝癌细胞生长.