pApoptin-EGFP真核表达载体的构建及其对膀胱肿瘤T24的促凋亡作用

摘要

目的构建真核表达质粒pApoptin-EGFP并探讨其对人膀胱肿瘤细胞株T24促凋亡作用。方法采用PCR的方法从质粒p3×flag-Apoptin-myc扩增出野生Apoptin片段,将其定向克隆于pEGFP-N1载体的EcoRⅠ和BamHⅠ酶切位点,构建能表达Apoptin-EGFP融合蛋白的真核表达质粒pApoptin-EGFP,酶切、测序鉴定,RT-PCR、荧光显微镜分析Apoptin基因表达,脂质体介导瞬时转染膀胱肿瘤T24细胞,流式细胞仪检测调亡及细胞周期变化。结果成功构建pApoptin-EGFP重组质粒,并在被转染细胞中检测到Apoptin基因表达;瞬时转染后不同时相点均可检测到细胞凋亡,与空质粒组相比具有显著差异,细胞周期表现为G1/G0期阻滞。结论成功构建pApoptin-EGFP真核表达质粒,重组质粒能在T24细胞中顺利表达Apoptin-EGFP融合蛋白,重组质粒转染可诱导T24细胞凋亡并阻滞细胞周期于G1/G0期。