人神经生长因子基因在大肠杆菌中的克隆、表达及产物纯化

摘要

从人胎盘组织中提取总DNA,经PCR扩增编码人β神经生长因子(β-NGF)成熟肽的基因,并克隆到大肠杆菌表达载体pET15b中。重组质粒pET15b-NGF经测序与报道的完全一致。重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,经IPTG诱导表达得到16kDa的目的蛋白带,与预期的大小一致,NGF表达量约占全菌总蛋白的25%。经过亲和层析柱(Ni2+-chargedIDAhis-bindcolumn)纯化后得到了单一的NGF蛋白条带,蛋白纯度可达90%以上,从每升表达菌液中可以得到4.56mgNGF。表达产物的Western印迹鉴定结果显示:重组人神经生长因子能与兔抗人β-NGF的多克隆抗体发生特异性结合反应,在16kDa处出现单一的条带,表明诱导表达的重组NGF具有免疫学活性。鸡胚背根神经节感觉神经元鉴定试验表明,表达的重组NGF具有良好的生物学活性。