缺氧调节肺腺癌小鼠MDSCs来源外泌体携带的miRNA及其免疫抑制功能

摘要

目的观察正常(21%O2)和缺氧(1%O2)条件下,髓源性抑制细胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSCs)来源外泌体(exosomes derived from MDSCs,MDSCs-EX)的免疫抑制功能,探究缺氧对MDSCs-EX携带miRNA成分以及免疫抑制能力的影响。方法构建肺腺癌小鼠移植瘤模型,磁珠分选脾脏中的MDSCs,分别在21%O2和1%O2条件下培养MDSCs,提取上清中的外泌体。通过透射电子显微镜观察形态、流式检测颗粒直径、Western bolt检测特异性蛋白鉴定制备的外泌体。观察正常和缺氧条件下MDSCs-EX对CD3+T细胞增殖的影响。对正常和缺氧条件下MDSCs-EX进行miRNA测序分析,观察2者在miRNA表达上的差异,将差异表达前十位的miRNA作为待筛选miRNA。运用siRNA特异性敲减待筛选miRNA,观察缺氧条件下MDSCs-EX携带的miRNA对其免疫抑制功能的影响。结果成功分选出肺腺癌小鼠脾脏中的MDSCs,并制备了正常和缺氧条件下的MDSCs-EX。相比正常条件下制备的MDSCs-EX,缺氧条件下MDSCs-EX对于CD3+T细胞增殖的抑制能力更强。敲减缺氧条件下MDSCs-EX中表达明显上调的miR-43-3p和Let-7c-5p,MDSCs-EX抑制CD3+T细胞增殖的能力减弱。结论相比正常氧含量环境,缺氧条件下制备的MDSCs-EX具有更强的免疫抑制能力,这与缺氧MDSCs-EX中携带更多的miR-43-3p和Let-7c-5p相关。