中国丁氏双鳍电鳐乙酰胆碱酯酶的制备亲和层析

摘要

用亲和层析法分离提纯了中国丁氏双鳍电鳐电器官乙酰胆碱酯酶（AchE,EC3.1.1.7）达到聚丙烯酰胺凝胶电泳纯。比活性可达78mMAch/小时/毫克蛋白质。每150克电器官制取酶纯品约4毫克。纯化AchE含酸性氨基酸约22％,碱性氨基酸约12％。紫外λmax=280毫微米。圆二色性波谱在209及220毫微米处呈现双负槽。以乙酰胆碱为底物时Km约0.18mM,最适底物浓度1～3mM,高底物浓度出现过量底物抑制效应。酶反应最适pH为7.5—8.0。含牛血清白蛋白或磷脂酰胆碱的电鳐Tris-HCl生理盐水或磷酸缓冲液中酶活性稳定。酶纯品可在-20℃储存,反复冻融及水冻干燥使酶严重失活。