霍乱毒素B亚基融合蛋白表达系统的构建

摘要

霍乱毒素Ｂ亚基（ＣＴＢ）是良好的免疫佐剂和载体蛋白。本研究通过定点突变，在ＣＴＢ基因（ｃｔｘＢ）３′端终止密码前引入了限制性内切酶ＥｃｏＲＩ，构建了质粒ｐＭＣ０５。ｐＭＣ０５中ＣＴＢ与下游ｌａｃＺ′基因阅读框架相同，转化大肠杆菌后能够表达ＣＴＢ与β－半乳糖苷酶α肽的融合蛋白；所表达的融合蛋白能与ＧＭ１结合，说明融合蛋白保持ＣＴＢ的基本高级结构和生物学活性；融合蛋白能与抗－ＣＴＢ抗体结合，说明融合蛋白具有ＣＴＢ的抗原性。以上结果表明：通过将外源抗原决定簇基因融合至ｃｔｘＢ的３′端，在大肠杆菌中表达融合蛋白，构建基因工程肽苗是可行的。还探索了转录终止序列对融合基因蛋白表达水平的影响，构建了高效表达融合蛋白的载体－宿主系统。