u-PA/t-PA嵌合型纤溶酶原激活剂（ut-PA）的构建、表达、纯化和性质研究

摘要

将尿激酶原（ｐｒｏ－ＵＫ）ｃＤＮＡ和组织型纤溶酶原激活剂（ｔ－ＰＡ）Ａ链ｃＤＮＡ克隆到Ｍ１３ｍｐ１８中，经过二次寡核甘酸诱导的大片段定点删除和一次寡核苷酸诱导的多位点突变，得到ｕ－ＰＡ（Ｌｅｕ１４４－Ｇｌｙ４０８）／ｔ－ＰＡ（Ｓｅｒ１－Ｔｈｒ２６３）（ｕｔ－ＰＡ）融合基因．将ｕｔ－ＰＡ融合基因克隆到表达载体ｐＣＭ－βｎｅｏ中，与ｐＣＭ－ｄｈｆｒ共转染ＣＨＯ／ＤＨＦＲ－细胞，筛选稳定表达株．收集无血清表达上清，经苯甲脒柱纯化得到ｕｔ－ＰＡ纯品，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和纤维蛋白自显影显示ｕｔ－ＰＡ有两种分子量形式，分子量分别为６８ｋＤ和６１ｋＤ．纤维蛋白亲和性试验表明，ＬＵＫ（低分子量尿激酶）对纤维蛋白没有亲和性，而含有ＬＵＫ的ｕｔ－ＰＡ则对纤维蛋白表现出很强的亲和性，但ｕｔ－ＰＡ的亲和性略低于亲本ｔ－ＰＡ．