生物素标记寡核苷酸探针探测扩增的病理性突变珠蛋白基因

摘要

用末端转移酶催化生物素核苷酸底物（Biotin-ll-dUTP）共价连接在合成的寡核苷酸3’羟基末端,从而合成了两种寡核苷酸探针(βT41-42及βA41-42)。用它们分别与克隆化扩增的正常和突变的β—珠蛋白基因片段杂变。结果表明该探针都具有与32P探针相似的特异性,其杂交的灵敏度为2—3pg（特异序列）。进而将探测HbS基因的正常和异常两种寡核苷酸19聚体（βA6和βS6）用32P和生物素分别标记;将HbS杂合子病人的白细胞DNA经聚合酶链反应（PCR）法扩增,并以含正常β—珠蛋白基因的DNA片段作对照,与两种探针分别进行斑点杂交。所得结果完全一致;Hbs杂合子DNA对正常和异常探针都显出杂交信号,而正常DNA只与βA探针显杂交信号。