谷胱甘肽S-转移酶活性中心的研究—羧基、氨基和胍基的化学修饰

摘要

用1-乙基-3-（3-二甲基氨基丙基）-碳二亚胺（EDC）,2.4.6.三硝基苯磺酸（TNBS）和丁二酮（DIC）分别修饰人胎盘型谷胱甘肽S-转移酶（GST-π）的羧基、氨基和胍基,研究了酶的失活动力学,发现引起一分子酶亚基全部失活所需抑制剂的分子数分别为1.0、1.08和0.98,提示每亚基只有一个羧基、氨基和胍基参与酶的活性中心。底物及其类似物谷胱甘肽,S-己烷或S-辛烷谷胱甘肽可保护GST-π免受上述抑制剂的修饰,使假一级反应速度常数k1明显降低,说明羧基、氨基和胍基是GST-π和GSH结合部位的组成基团。作者曾证明GST-π中的一个快反应巯基也参与酶与GSH的结合,故至少有四个不同的基团是酶亚基的结合基团,本文还对TNBS对氨基修饰的特异性作了验证,并讨论了GST-π与GSH结合时形成离子键的情况。