水稻氨基酰化酶的分离纯化与性质分析

摘要

氨基酰化酶（N－acylamino－acidamidohydrolase或acylaseⅠ，EC3．5．1．14）是专一水解N-酰基化L-氨基酸的蛋白酶．从水稻黄化苗得到的抽提液，经过硫酸铵分级沉淀、丙酮分级沉淀和阴离子交换层析三个步骤，纯化得到了该酶，比活达到100U／mg蛋白，在无还原剂存在的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳上显单一条带，分子量为40kD．而凝胶层析分析表明活性分子的分子量约90kD，因此可推测它的活性分子由两个亚基通过非共价键作用组合而成．进一步研究此酶的性质，在所测的五种乙酰化氨基酸中，最适底物为N-乙酰-L-甲硫氨酸．该酶的最适温度为50℃，最适pH为7．0～8．0．Co2＋和Zn2＋能增强酶活性，但烷基化试剂对酶活性没有影响，表明酶活性中心不含活化的巯基或羟基基因