无色杆菌蛋白酶Ⅰ突变体的结构与稳定性研究

摘要

报道了用定住诱变技术，改变无色杆菌蛋白酶Ⅰ的酶原加工位点，使其向左或向右移动，导致突变体成熟酶的肽链从N端延长或缩短若干氨基酸残基．所获突变体显示了低于野生酶的活性．突变体的园二色谱和荧光光谱研究表明，它们的结构发生了某些微小的改变．在不同的pH值、温度和不同浓度的SDS和盐酸胍条件下，也表现了低于天然酶的稳定性．在N端延长的突变体中，酶原加工位点越远离天然加工位点的突变体，显示了越低的活性和稳定性．缩短的突变体活性和稳定性最低．这些结果表明，天然成熟酶的N端可能比较靠近酶的活性中心，并参与构成活性中心附近的局部构象由此可见N端区在成熟酶的结构与功能方面的重要作用．