林生山黧豆谷氨酸脱羧酶的分离纯化及部分性质的研究

摘要

以林生山黧豆为材料，利用硫酸按分段盐析，丙酮沉淀，DEAE-SepharoseFF离子交换柱层析，SephacrylS300凝胶过滤柱层析及FPLC-MonoQ柱层析技术，以聚酰胺薄膜层析荧光定量法为酶活力检测手段，分离纯化了谷氨酸脱羧酶，达到电泳银染纯．纯化后的林生山黧豆谷氨酸脱羧酶活力达375．09U·mp-1，纯化倍数38．2倍，经SDS-PAGE测定，其亚基分子量为70kD，经梯度PAGE确定，天然分子量为140kD，表明该酶是由两个亚基组成的二聚体．酶学研究表明，纯化的林生山黧豆谷氨酸脱羧酶的最适pH值为5．4，对谷氨酸的Km值为1．62×10-3mol·L-1，酶的最适温度为40℃，酶特异性地使谷氨酸脱羧，不能使天门冬氨酸等其它氨基酸脱羧．